初級檢驗(yàn)技士考試輔導(dǎo):交叉配血（凝聚胺法）

　　1. 原理

　　凝聚胺(polymatching)法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，促進(jìn)血清(漿)中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因電荷中和而分散，而由抗體介導(dǎo)的特異性凝集則不會分散。

　　2. 標(biāo)本采集：環(huán)球網(wǎng)校

　　2.1 標(biāo)本種類：抽取靜脈血3-4ml待凝固后分離血清，將細(xì)胞配成5%鹽水懸液將供血者血樣以同樣方法分離血清(漿)和紅細(xì)胞懸液。

　　2.2 標(biāo)本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主張用EDTAK2(mg/dz)抗凝標(biāo)本應(yīng)無溶血，切標(biāo)簽齊全。

　　3. 標(biāo)本儲存：急診標(biāo)本30分鐘內(nèi)完成操作，標(biāo)本應(yīng)至4℃冰箱保存7天。

　　4. 標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸。

　　5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染。溶血標(biāo)本，標(biāo)簽不齊全不能作測定。

　　6. 試劑：

　　6.1 試劑名稱：凝聚胺試劑(polymatching)

　　6.2 試劑生產(chǎn)廠家：(臺資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

　　6.3 試劑組成：

　　試劑1. 低離子介質(zhì)(LowLonic Medium，LIM).試劑打開使用后，可置室溫貯存，未開封者2-10度貯存，有效期為2年。

　　試劑2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).貯存及有效期同上。

　　試劑3. 重懸液(ResuspendingSolution).貯存及有效期同上。

　　試劑4. 8.5%生理鹽水。

　　7. 儀器：

　　7.1 血型血清索離心機(jī)：XTL-4.7 上海離心機(jī)械研究所

　　7.2 離心機(jī)：上海手術(shù)器械廠

　　7.3 電熱恒溫水箱：北京長源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠

　　7.4 顯微鏡：OLYMPUS(日本)

　　8. 操作步驟及結(jié)果判斷：

　　8.1 供受者紅細(xì)胞用生理鹽水配成3-5%的細(xì)胞懸液。加樣量均為：血清2滴，紅細(xì)胞懸液1滴。主管：受血者血清+供者紅細(xì)胞懸液;次管：受者紅細(xì)胞懸液+供者血清;(陰陽對照管另設(shè))。

　　8.2 各管分別加低離子介質(zhì)0.6ml混勻置室溫1分鐘。加凝聚胺溶液2滴，混勻，置室溫15秒。

　　8.3 1000g(3000rpm)，離心18秒，棄上清液，管底保留約2滴液體。輕搖

　　試管，觀察是否形成凝塊。如未形成凝塊，則重做前面試驗(yàn)。

　　8.4 加入2滴重懸液，輕輕混合，肉眼或顯微鏡下觀察結(jié)果。

　　8.5 凝塊在1分鐘內(nèi)分散，試驗(yàn)結(jié)果為陰性，供受者血液配合;反之，如依照為不同強(qiáng)度的凝塊，試驗(yàn)結(jié)果判為陽性，供受者血液不配合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須在3分鐘內(nèi)判讀。

　　9. 操作性能： 快速簡便，特異性強(qiáng)，靈敏度較高，重復(fù)性好。

　　10. 超出范圍結(jié)果處理：

　　10.1 細(xì)胞自凝： 在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致交叉配血假陽性;遇此現(xiàn)象可用37℃-40℃生理鹽水洗滌紅細(xì)胞并置37℃水溶中輕輕搖動，觀察結(jié)果。

　　10.2 若病人血清(血漿)含有肝素，如洗腎患者能影響配血，須多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

　　10.3 紅細(xì)胞懸液為5%為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不明顯易誤判。

　　10.4 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。

　　11. 方法局限性：

　　11.1 試管，滴管吸頭和玻片必須清潔干燥，防止溶血。

　　11.2 操作方法應(yīng)按規(guī)定，先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。

　　11.3 離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。

　　11.4 觀察時應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集，繼發(fā)性凝固及線狀排列的區(qū)別。

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