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      血涂片制備和細(xì)胞染色的基本方法-2018檢驗(yàn)技師考試精華考點(diǎn)

      更新時(shí)間:2017-12-21 14:51:13 來(lái)源:環(huán)球網(wǎng)校 瀏覽42收藏16

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        血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法,臨床上應(yīng)用極為廣泛,特別是對(duì)于各種血液病的診斷具有重要的價(jià)值,近年來(lái)血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用,血涂片的觀察也可作為判斷儀器結(jié)果的簡(jiǎn)易方法。比臺(tái)觀察10個(gè)高倍視野血涂片中白細(xì)胞和血小板數(shù)大致估計(jì)血內(nèi)這些細(xì)胞的數(shù)量,借以作為儀器結(jié)果分析后質(zhì)控的參考。

        但積壓涂片制備和染色不良,常使細(xì)胞鑒別發(fā)生困難,甚至導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)論。例如,血膜過(guò)厚細(xì)胞重疊縮小,血膜太薄白細(xì)胞多集中于邊緣,細(xì)胞分布不勻;染色偏酸或偏堿均可使細(xì)胞染色反應(yīng)異常。因皮制備厚薄適宜,分布均勻,染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的重要革本技術(shù)之一。

        血涂片制備方法及注意事項(xiàng)將在實(shí)習(xí)指導(dǎo)中詳細(xì)介紹。

        1.瑞特(Wright)染色法:為發(fā)觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu),識(shí)別各種細(xì)胞及其異常變化,血涂片必須嘲行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變來(lái)的。目前常用瑞特染色法。

        (1)瑞特染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成有復(fù)合染料。亞甲藍(lán)為四甲基硫堇染料,有對(duì)醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽,即氯化美藍(lán)。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級(jí)染料。市售美藍(lán)中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。即伊紅和伊混合后,產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅美藍(lán)中性沉淀,即瑞特染料。

        (2)細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用,又有化學(xué)的親和作用,各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同,對(duì)各種染料的親和力也不一樣。因此,用本染料液染色后,在同一血片上,可以看到各種不同的色彩,例如血紅蛋白,嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)果,染粉紅色,稱(chēng)為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,染紫藍(lán)色,稱(chēng)為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,染淡紫色,稱(chēng)為中性物質(zhì)。

        (3)PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均不蛋白質(zhì),由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液PH而定,在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多,易與伊紅結(jié)合,染色偏紅;在偏三性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)或天青結(jié)合,染色偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感,染色用正經(jīng)片必須清潔,無(wú)酸堿污染。配制頊特液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇,稀釋染色必須用緩沖液,沖洗用水應(yīng)近中性,否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常,以致識(shí)別困難,甚至造成錯(cuò)誤。

        新鮮配制的染料偏堿,須在室溫或是37℃下貯存一定時(shí)間,待染料成熟,主要是美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后才能使用,貯存時(shí)愈久,染色效果愈好。EAm GILLILAND等采用吸光度比值作為頊特染液的質(zhì)量規(guī)格。rA測(cè)定方法如下:取瑞特染液15-25μl(視染液濃度而定),加甲醇10ml稀釋?zhuān)靹蚝笠约状紴榭照酃?,分別以波長(zhǎng)650nm和25nm比色。Ra=a650/a525.因?yàn)槊浪{(lán)吸收峰小組長(zhǎng)為650nm,伊紅吸收峰波長(zhǎng)為525nm ;天青B吸收峰也為650nm但吸光度A約為美藍(lán)的一半。所以新配染料rA接近2,隨著美藍(lán)逐漸氧化為天青B,RA也相應(yīng)下降。RA下降到1.3±0.1時(shí)即可使用。瑞特染液貯存過(guò)程中,必須塞嚴(yán),以防止甲醇揮發(fā)和被氧化成甲酸。有人主張?jiān)谂浞街屑尤敫视?0ml,防止甲醇揮發(fā),關(guān)可合細(xì)胞染色清晰。甲醇必須純凈,如甲醇中丙酮含量過(guò)多,染色偏酸,使白細(xì)胞著色不良。

        2.吉姆薩(Giemsa)染色法:吉姆薩染液由天青,伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對(duì)細(xì)胞核和寄生蟲(chóng)著色較好,結(jié)構(gòu)顯示更不清晰,而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長(zhǎng),可用復(fù)合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液,按瑞特染色法染10min.或先用瑞特染色法染色后,再用稀釋吉姆薩復(fù)染。

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